摘要：無菌實(shí)驗(yàn)室設(shè)有無菌操作間、緩沖間和更衣間，無菌操作間潔凈度達(dá)到10000級(jí)，超凈臺(tái)潔凈度達(dá)到100級(jí)且室內(nèi)溫度應(yīng)保持在20~24℃，濕度保持在45%~60%[1]，此設(shè)置不僅滿足人體舒適度且又不利于室內(nèi)微生物的生存

01.室內(nèi)環(huán)境管理

無菌實(shí)驗(yàn)室設(shè)有無菌操作間、緩沖間和更衣間，無菌操作間潔凈度達(dá)到10000級(jí)，超凈臺(tái)潔凈度達(dá)到100級(jí)且室內(nèi)溫度應(yīng)保持在20~24℃，濕度保持在45%~60%[1]，此設(shè)置不僅滿足人體舒適度且又不利于室內(nèi)微生物的生存。初效、中效過濾器需要6個(gè)月更換1次，高效過濾器需要每年更換1次，以保證室內(nèi)潔凈度達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。紫外燈應(yīng)定期檢查更換，達(dá)到使用壽命會(huì)影響消毒滅菌的效果，同時(shí)應(yīng)加強(qiáng)其他指標(biāo)的監(jiān)測，如潔凈度、細(xì)菌菌落數(shù)、靜壓差和風(fēng)量等。

02.物流管理

經(jīng)過γ射線滅菌的細(xì)胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、離心管等用1000mg/L濃度的消毒液徹底擦拭器材表面，消毒后放置于傳遞窗中，紫外燈照射30min后方可帶入實(shí)驗(yàn)室。高壓消毒的器材如止血鉗、治療盤、離心套管等要用包布包裹2層，經(jīng)高壓蒸汽滅菌和烤箱烘干后使用。使用前應(yīng)檢查物品包裹內(nèi)外各種監(jiān)測指示劑是否符合要求，再?zèng)Q定使用。貯存器材可放入無菌室的柜櫥內(nèi)，若超過有效期應(yīng)重新滅菌。進(jìn)包裝間要嚴(yán)格洗手，穿工作衣、戴口罩、帽子，包裝前檢查包布、治療巾，應(yīng)清潔干燥無破損，做到一用一洗一消毒，各類器材應(yīng)光潔無銹、性能完好齊全。

外用3M化學(xué)指示膠帶封貼并注明品名、包裝者、查對者、滅菌期及有效使用期，各類滅菌包包扎應(yīng)松緊適度、整齊，減少各種污染的機(jī)會(huì)。所有實(shí)驗(yàn)室器材需在最外層傳遞窗中用紫外燈照射30min后方可帶入緩沖間。滅菌包需在緩沖間內(nèi)剝?nèi)プ钔鈱影己蠓娇蓭霟o菌操作間。在無菌操作間內(nèi)剝?nèi)?nèi)層包布后擺放到固定位置備用。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)各種器材要排放有序，定期檢查，補(bǔ)充基數(shù)。為保證潔凈度，應(yīng)嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。污敷料及垃圾廢液等應(yīng)分別放入專用廢液缸和污物桶中，待操作完畢后移出實(shí)驗(yàn)室。徹底清潔室內(nèi)物品及地面，減少污物在室內(nèi)的停留時(shí)間。

對已污染或疑似污染培養(yǎng)基、細(xì)胞因子等應(yīng)立即丟棄。實(shí)驗(yàn)室設(shè)定了單獨(dú)的陽性工作區(qū)域，包括陽性無菌操作間、緩沖間和更衣間。陽性工作區(qū)域與陰性工作區(qū)域完全隔離，防止肝炎病毒通過血液及相關(guān)物品等感染陰性患者回輸?shù)募?xì)胞，防止患者通過細(xì)胞回輸感染乙肝病毒。工作人員進(jìn)入陽性區(qū)域后，不得再進(jìn)入陰性區(qū)域，陽性間每次使用的洗手衣需加入1000mg/L濃度消毒液，洗滌晾干以備下次使用，每次進(jìn)入陽性間所著一次性隔離衣在用后應(yīng)棄于陽性間垃圾袋中，陽性液體污物應(yīng)瓶裝密封后放入陽性間醫(yī)療垃圾袋中。陽性醫(yī)療垃圾袋從陽性間的傳遞窗中傳出，放入專用醫(yī)療垃圾桶中，由院內(nèi)專人負(fù)責(zé)回收。

03.運(yùn)行制度管理

工作人員于每次實(shí)驗(yàn)操作前30min打開實(shí)驗(yàn)室空氣凈化系統(tǒng)和紫外燈。如果實(shí)驗(yàn)室長期不用，需要在實(shí)驗(yàn)前3h打開空氣凈化系統(tǒng)，以提高空氣潔凈度。在潮濕季節(jié)使用時(shí)，打開紫外燈時(shí)間需適當(dāng)延長，以加強(qiáng)消毒效果，保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。進(jìn)入無菌實(shí)驗(yàn)室的人員要嚴(yán)格著裝，穿著經(jīng)嚴(yán)格高壓蒸汽滅菌過的洗手衣、隔離衣、口罩、帽子及用10g/L過氧乙酸溶液浸泡后晾干的拖鞋。著裝程序如下：進(jìn)入第一更衣間后脫掉外衣?lián)Q一更拖鞋;隨即進(jìn)入第二更衣間，穿戴經(jīng)高壓蒸汽滅菌的一次性口罩帽子，著洗手衣?lián)Q二更拖鞋，帶無菌橡膠手套;進(jìn)入第三更衣間后著隔離服，換三更拖鞋，之后方可進(jìn)入無菌操作間操作。

保持實(shí)驗(yàn)室相對密閉狀態(tài)，嚴(yán)格控制人員進(jìn)出，必要情況下需要工作人員互相溝通協(xié)調(diào)時(shí)，可通過房間對講電話聯(lián)絡(luò)，將工作人員出入次數(shù)降到最低，減少不必要的渦流形成，使室內(nèi)的氣壓始終處于正壓狀態(tài)。各項(xiàng)操作要集中，操作過程要輕穩(wěn)，不能在實(shí)驗(yàn)室抖動(dòng)衣物布類，以防止微粒在室間飛揚(yáng)，保證室間空氣的潔凈。實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)入無菌操作間應(yīng)衣帽整潔、修剪指甲，嚴(yán)格執(zhí)行無菌技術(shù)操作。一切操作必須在百級(jí)凈化的超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，超凈工作臺(tái)在使用前需打開其紫外燈輻照滅菌30min以上，并同時(shí)打開超凈工作臺(tái)進(jìn)行吹風(fēng)。實(shí)驗(yàn)中應(yīng)保持無菌操作，拿取物品不要跨過無菌面；培養(yǎng)瓶不要過早打開，對于已開瓶口者要盡量避免垂直放置;吸管等不能觸及瓶口，以防細(xì)菌污染或細(xì)胞的交叉感染。每次操作過程中留取定量樣品進(jìn)行細(xì)菌、真菌、支原體檢測，以檢查無菌操作的可靠性及細(xì)胞是否污染。操作完畢后應(yīng)及時(shí)清理無菌實(shí)驗(yàn)室。組織實(shí)驗(yàn)室全體人員進(jìn)行理論學(xué)習(xí)，明確無菌實(shí)驗(yàn)室工作原理、環(huán)境要求，設(shè)置嚴(yán)格的工作流程，明確分工并強(qiáng)化責(zé)任技師有效的合作配合意識(shí)。

04.衛(wèi)生清潔管理

清潔工作應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室空氣凈化系統(tǒng)運(yùn)行中進(jìn)行，清潔工具采用不掉纖維的織物材料制作。一切清潔工作必須采用濕式打掃，每周進(jìn)行1次徹底清潔。需用1000mg/L含氯消毒液擦拭房間桌、椅、墻壁、天花板以及轉(zhuǎn)凳、顯微鏡等固定在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的物體。用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精擦拭培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)和紫外線燈管。地板很容易藏塵(如人體皮膚、毛發(fā)的脫落、布類的纖維等)、藏菌等，是室內(nèi)的污染源，應(yīng)在吸塵器吸除后用1000mg/L含氯消毒液擦拭。抽風(fēng)、回風(fēng)口也易藏塵、藏菌，應(yīng)重點(diǎn)拆洗清潔，以確保塵埃過濾效果。衛(wèi)生清潔時(shí)應(yīng)用10g/L過氧乙酸溶液浸泡消毒工作人員所穿的拖鞋，待晾干后再使用。每周進(jìn)行徹底清潔時(shí)應(yīng)將實(shí)驗(yàn)室內(nèi)物品如移液器、移液器槍頭、止血鉗、治療盤(蕁蕁上接第76頁蕁蕁)以及離心機(jī)套管等進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。清潔工作完成后，手術(shù)室凈化系統(tǒng)繼續(xù)運(yùn)行時(shí)間一般不應(yīng)少于30min。